上海仁捷生物-五個(gè)原則讓你做好免疫膠體金稀釋液

制備好免疫膠體金后，還需要將其稀釋到一定濃度，并吸附于特殊的惰性介質(zhì)中才能夠zui終制成產(chǎn)品。一般來(lái)說(shuō)，特殊的介質(zhì)常用的是玻璃纖維或無(wú)紡布。玻璃纖維和無(wú)紡布本身一般是疏水的，膠體金產(chǎn)業(yè)一般采用表面活性劑預(yù)處理過(guò)的玻璃纖維或無(wú)紡布，通常配方為1%Tween20+適量PVA。介質(zhì)處理完成后，免疫膠體金稀釋液的配伍才是zui關(guān)鍵的。現(xiàn)總結(jié)原則如下：

1、合適的離子種類(lèi)和強(qiáng)度

免疫膠體金畢竟是含有生物活性分子，應(yīng)用時(shí)還要面對(duì)千差萬(wàn)別的樣品，原則上需要稀釋在合適PH的緩沖液中。經(jīng)驗(yàn)值是6-9。在這個(gè)范圍內(nèi)可選的緩沖主要有Tris和PB，也不排除其他種類(lèi)緩沖適用的可能。當(dāng)使用的緩沖離子強(qiáng)度過(guò)大如超過(guò)0.2M時(shí)，有可能造成釋放、層析不好或檢測(cè)結(jié)果異常。離子的種類(lèi)也因?yàn)槊庖吣z體金的生物分子不同而有諸多限制，例如鈣調(diào)蛋白可能與Ca2+離子有關(guān)系。而鹵素離子強(qiáng)度對(duì)膠體金穩(wěn)定性似乎有特殊的破壞作用，教科書(shū)式的NaCl調(diào)試zui適標(biāo)記條件就是例子。

2、大分子物質(zhì)作為膠體金干燥后均勻散布的骨架

這個(gè)其實(shí)是凍干工藝的理論基礎(chǔ)，適用于膠體金干燥工藝，對(duì)凍干有研究的應(yīng)該對(duì)這個(gè)工藝感覺(jué)很小兒科。抽真空是一個(gè)熱力學(xué)吸熱過(guò)程，實(shí)驗(yàn)表明免疫膠體金的真空干燥是一個(gè)先冷凍再升華的過(guò)程，十分類(lèi)似凍干。無(wú)紡布材料的工藝由于干燥過(guò)程快，多數(shù)采用烤干的工藝，但是大分子的骨架作用仍然是對(duì)產(chǎn)品的釋放速度和比率有很大幫助。常用大分子物質(zhì)如PEG4000、PEG20000、PVP等，建議盡量從中選擇一種添加使用。

3、小分子物質(zhì)對(duì)蛋白活性保護(hù)

蛋白儲(chǔ)存常用的甘油、蔗糖、海藻糖、各類(lèi)低聚糖等，對(duì)產(chǎn)品的儲(chǔ)存穩(wěn)定性有幫助，忽略這部分物質(zhì)的添加可能限制產(chǎn)品從實(shí)驗(yàn)室走生產(chǎn)和市場(chǎng)。這類(lèi)物質(zhì)也是凍干細(xì)胞常用的。

4、惰性蛋白

這類(lèi)物質(zhì)的功能就更復(fù)雜。首先還是保護(hù)目的蛋白的活性，也維持膠體金的膠體穩(wěn)定，它們是消除非特異性的封閉物質(zhì)，也起著有分散膠體金顆粒的骨架作用。常用有BSA、OVA、Casein，其他廉價(jià)蛋白似乎不太好找，脫脂奶粉個(gè)人建議不用，質(zhì)量太難控制了，當(dāng)然如果大家已經(jīng)在用而且效果不錯(cuò)，也沒(méi)有必要過(guò)于擔(dān)心。

5、表面活性劑

這個(gè)東西在這個(gè)產(chǎn)業(yè)里可是萬(wàn)萬(wàn)不能缺少，但是吸附材料已經(jīng)用表面活性預(yù)處理的，也可以不拘泥于添加在免疫膠體金稀釋液里。一般情況下，Tween20就可以了，其實(shí)蛋白質(zhì)復(fù)性常用的非離子型表面活性劑都可以一試，前一段時(shí)間某位高人說(shuō)TritonX-100等可能會(huì)干擾蛋白的N末端建議不要用，我聽(tīng)了不是很理解，在這里請(qǐng)高人指點(diǎn)。

6、其它

產(chǎn)品種類(lèi)千差萬(wàn)別，以上5類(lèi)物質(zhì)外，傳說(shuō)還有一些可以“提高產(chǎn)品敏感性”、“提高產(chǎn)品檢測(cè)線(xiàn)性范圍”、“強(qiáng)制轉(zhuǎn)換**檢測(cè)*cut-off范圍”、“HAMA效應(yīng)抑制”和”線(xiàn)條規(guī)定時(shí)間深度變化終止“等神秘添加物，從理論上不排除存在的可能，但是往往一種“神物”有效的范圍十分狹窄，也就是說(shuō)一種“神物”可能只適用于一個(gè)公司一種抗體的一個(gè)產(chǎn)品，換個(gè)環(huán)境就無(wú)效了。尋找神物的工作往往是研發(fā)型的大公司的資深技術(shù)人員，而對(duì)神物的控制往往也是如同企業(yè)一級(jí)機(jī)密。